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IPTG(異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷)的介紹

文章來源:冰峰化工

異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)

 

    IPTG即異丙基-β-D-硫代半乳糖苷,是一種常用的分子生物學試劑,其應用主要包括以下方面:

 

1.蛋白表達誘導

● 在基因工程中,IPTG可誘導含lac操縱子的重組質粒在大腸桿菌等宿主菌中表達外源蛋白。通過與lacI阻遏蛋白結合,改變其構象,使阻遏蛋白從操縱基因上解離,從而啟動下游目的基因的轉錄和表達,進而使宿主菌大量合成目標蛋白質,便于后續的分離和純化,如生產重組人胰島素等藥用蛋白.

● 可用于優化蛋白表達條件,通過調整IPTG的濃度、誘導時間和誘導溫度等參數,找到蛋白表達條件,提高蛋白的表達量和可溶性,減少包涵體的形成.

 

2.藍白斑篩選

IPTG常與X-Gal或Blue-Gal結合使用,用于重組細菌菌落的藍白篩選。IPTG誘導含lacZ基因的重組質粒表達β-半乳糖苷酶,該酶可水解X-Gal或Blue-Gal產生藍色產物,使含有重組質粒且lacZ基因未被破壞的菌落呈現藍色,而插入目的基因導致lacZ基因失活的重組菌落則為白色,從而方便地挑選出基因重組體.

 

3.啟動子活性檢測

將不同啟動子控制的lacZ報告基因重組質粒轉入大腸桿菌,經IPTG誘導后,根據產生藍斑的多少來評價啟動子的活性強弱,藍斑越多,說明啟動子活性越高,為研究基因表達調控提供重要手段.

 

4.變異體篩選

對含有lacZ作為報告基因的重組質粒進行隨機誘變后轉入大腸桿菌,利用IPTG誘導和Blue-Gal顯色,通過檢測藍斑消失的變異菌株,可找出影響基因表達的重要區段或關鍵核苷酸,有助于研究基因結構與功能的關系.

 

5.蛋白相互作用檢測

在兩個蛋白質之間克隆lacZ,使兩蛋白的相互作用可導致lacZ表達。將重組質粒轉入大腸桿菌,在不同條件下用IPTG誘導并經Blue-Gal染色,通過觀察藍斑的形成與消失,判斷兩蛋白的相互作用與結合情況,為研究蛋白質之間的相互作用提供了一種有效的方法.

 

說明:IPTG是一種類乳糖物,和X9a1(半乳糖酶作用底物)配合使用,可用于克隆菌的藍白斑篩選。在原核表達中,是一種安慰型誘導物,可誘導目的蛋白的產生,其本身不會被分解。

 

利用發酵工程生產的生物藥物主要包括以下幾類:

• 抗生素:如青霉素、頭孢菌素等。

• 維生素:如維生素B2、維生素B12、維生素C等。

• 氨基酸:如精氨酸、谷氨酸鈉、L-谷氨酰胺等。

• 核苷酸:如肌苷酸、肌苷、5'-腺苷酸(AMP)、三磷酸腺苷(ATP)等。

• 酶與輔酶:如L-天冬酰胺酶、鏈激酶、NAD、NADP、COA等。

• 免疫調節劑:如免疫增強劑、免疫抑制劑等。

• 甾體激素:如可的松、地塞米松等。

• 其他生物技術藥物:如干擾素、胰島素、生長因子等。

 

這些藥物在醫療、保健等領域發揮著重要作用,極大地改善了人類的生活質量。

 

 

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